Человеческий ferritin, набор FE ELISA

Материалы обеспеченные с набором

Процедура

Разбавление стандартов

колодцы 1.Ten установили для стандартов в stripplate Microelisa. В хорошо 1 и хорошо 2, стандартное решение 100μl и стандартный буфер разбавления 50μl добавлены и смешаны хорошо. В хорошо 3 и хорошо 4, решение 100μl от хорошо 1 и хорошо 2 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. решение 50μl сброшено от колодца 3 и хорошо 4. В хорошо 5 и хорошо 6, решение 50μl от хорошо 3 и хорошо 4 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. В хорошо 7 и хорошо 8, решение 50μl от хорошо 5 и хорошо 6 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. В хорошо 9 и хорошо 10, решение 50μl от хорошо 7 и хорошо 8 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. решение 50μl сброшено от колодца 9 и хорошо 10. После разбавления, полный том во всех колодцах 50μl и концентрация 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml и 2ng/ml, соответственно.

2. В stripplate Microelisa, выйдите колодец пустой как пустой контроль. В колодцах образца, добавлен буфер разбавления образца 40μl и образца 10μl (множитель дилюции 5). Образцы должны быть нагружены на дно без касаться хорошей стене. Смешайте хорошо с нежный трясти.

3. Инкубация: инкубируйте минуту 30 на 37℃ после загерметизированный с мембраной плиты закрытия.

4. Разбавление: разбавьте сконцентрированный моя буфер с дистиллированной водой (30 раз для 96T и 20 раз для 48T).

5. Стирка: осторожно слезьте мембрану плиты закрытия, аспирируйте и refill с моющим раствором. Сбросьте моющий раствор после отдыхать на 30 секунд. Повторите моя процедуру для 5 раз.

6. Добавьте реагент HRP-конъюгата 50 μl к каждому колодцу за исключением пустого контроля хорошо.

7. Инкубация как описано в разделе 3.

8. Стирка как описано в разделе 5.

9. Расцветка: Добавьте решение a хромогена 50 μl и решение b к каждому колодцу, смешивание хромогена 50 μl с нежно трясти и инкубируйте на 37℃ на 15 минут. Пожалуйста избегите света во время расцветки.

10. Прекращение: добавьте 50 μl останавливает решение к каждому колодцу для того чтобы прекратить реакцию. Цвет в колодце должен изменить от сини для того чтобы пожелтеть.

11. Прочитанный absorbance O.D. на 450nm используя читателя плиты Microtiter. Значение OD пустого контроля хорошо установленное как нул. Assay должен быть унесен не позднее 15 минут после добавления останавливает решение.

Точность

точность Intra-assay (точность в пределах assay): 3 образца с низким, средним и высокопоставленным человеческим Ferritin (FE) были испытани 20 раз по одна плита, соответственно.

точность Интер-assay (точность между assays): 3 образца с низким, средним и высокопоставленным человеческим Ferritin (FE) были испытани по 3 различных плиты, 8 копий в каждой плите.

CV (%) = SD/meanX100

Intra-Assay: CV<10>

Интер-Assay: CV<12>

Ряд Assay

0.4ng/ml-25ng/ml