Α фактора некроза опухоли крысы, Cachectin, TNF, TNFSF2, НАБОР TNF-α ELISA

Материалы обеспеченные с набором

Принцип

Этот набор ELISA использует сэндвич-ELISA как метод. Stripplate Microelisa обеспеченное в этом наборе былопокрыто с антителом специфическим к TNF-α. Стандарты или образцы добавлены к соотвествующим колодцам stripplate Microelisa и совместили к специфическому антителу. После этого пероксидаза хрена (HRP) - проспряганное антитело специфическое для TNF-α добавлена к каждому stripplate Microelisa хорошо и инкубирована. Свободные компоненты помыты прочь. Решение субстрата TMB добавлено к каждому колодцу. Только те колодцы которые содержат TNF-α и HRP проспрягали антитело thrombomodulin покажутся голубыми в цвете и после этого повернутся желтым после добавления решения стопа. Оптически плотность (OD) измерена спектрофотометрически на длине волны 450 nm. Значение OD пропорционально к концентрации TNF-α. Вы можете высчитать концентрацию TNF-α в образцах путем сравнивать OD образцов к стандартной кривой.

Примечания:

• Храните набор на 4°C на получении. Набор должен быть эквилибрирован к комнатной температуре перед assay. Извлеките все ненужные прокладки из TNF-α Антител-покрыл плиту, заново герметизируйте их в zip-lock фольге и сдержите на 4°C.
• Преципитаты могут появиться в сконцентрированный моя буфер. Пожалуйста нагрейте буфер для того чтобы растворить все преципитаты, которые не повлияют на результаты.
• Точная пипетка должна быть использована для избежания экспириментально ошибки. Образцы должны быть добавлены к Microplate в меньше чем 5 минутах. Если большое количество образцов включены, то пипетка множественного канала порекомендована.
• Стандартная кривая должна быть включена в каждом assay. Колодцы копии порекомендованы. Если значение OD образца больше чем первый колодец стандартов, то пожалуйста разбавьте образец (времена n) перед тестом. Высчитывая первоначальную концентрацию thrombomodulin, пожалуйста умножьте полный множитель дилюции (XnX5).
• Во избежание взаимн загрязнение, уплотнители Microplate для бывшей пользы только.
• Пожалуйста держите субстрат далеко от света.
• Полностью деятельность должна быть соответствием с инструкциями изготовителя строго. Результаты определенные читателем плиты Microtiter.
• Все образцы, моя буфер и отходы должны быть обработаны как заразные агенты.
• Реагенты от различных серий не должны быть смешаны.

Известная концентрация стандарта TNF-a и своего соответствуя чтения OD проложена курс в масштабе журнала (x-оси) и масштабе журнала (Y-osи) соответственно. Концентрация TNF-a в образце определена черчением O.D. образца на Y-osи. Первоначальная концентрация высчитана путем умножать множитель дилюции.