Описание продукта:

Цель

Этот комплект позволяет определять концентрации VCAM-1 в сыворотке человека, клеточных культурах и других биологических жидкостях.

Принцип анализа

Набор анализирует уровень человеческого ВКАМ-1 в образце, использует очищенное человеческое ВКАМ-1 антитело для покрытия микротитровых скважин, делает твердофазные антитела, затем добавляет ВКАМ-1 в скважины,Комбинированное антитело VCAM-1, которое с HRP, превращается в антитело-антиген-энзим-антитело комплекс, после мытья полностью, добавить раствор TMB субстрата, TMB субстрата становится синего цвета при HRP фермент-катализируемый,Реакция заканчивается добавлением раствора серной кислоты и изменение цвета измеряется спектрофотометрически на длине волны 450 нмЗатем концентрация человеческого VCAM-1 в образцах определяется путем сравнения ОД образцов со стандартной кривой.

Материалы, поставляемые вместе с набором

Технические параметры:

Требования к образцам

• Если это невозможно, то следует проводить эксперимент как можно скорее после сбора образца и согласно соответствующей литературе.образец может храниться при температуре -20 °C для сохраненияИзбегайте повторных циклов заморозки и размораживания.
• Невозможно обнаружить образцы, содержащие NaN3, потому что NaN3 ингибирует HRP актив.

Процедура оценки

• Разбавлять и добавлять образец:Разбавлять Стандарт первоначальной плотности в следующей таблице:

2. Добавление образца: устанавливать пустые скважины отдельно (пустые скважины сравнения не добавляют образца и HRP-конъюгированный реагент, иначе каждая этапа операции одинакова).Добавить 50μl стандартного в Microelisa стрипплет, добавить разведение пробы 40μl в пробную скважину, затем добавить пробную скважину 10μl (конечная разведение пробы 5 раз), добавить пробу в скважины, не прикасаться к стене скважины, насколько это возможно, и аккуратно перемешать.

3Инкубировать: после закрытия пластины мембраной закрытия пластины инкубировать в течение 30 минут при температуре 37°C.

4. Конфигурировать жидкость: 30-кратный (или 20-кратный) раствор для промывания, разбавленный 30-кратным (или 20-кратным) разрядом с дистиллированной водой и резервом.

5.мытье: раскрыть закрытие пластинки мембраны, выбросить жидкость, высушить по качелю, добавить стиральный буфер в каждый колодец, еще на 30 минут, затем слить, повторить 5 раз, высушить пощечиной.

6. Добавление фермента: Добавление реактива HRP-Conjugate 50μl в каждую скважину, кроме пустой скважины.

7Инкубация: операция с 3.

8- Умывание: операция с 5.

9. Цвет: Добавьте хромогенный раствор A 50ul и хромогенный раствор B 50ul в каждую скважину, избегайте сохранения света в течение 10 минут при 37°C

10. Прекратите реакцию: добавьте Stop Solution50μl в каждую скважину, Прекратите реакцию ((синий цвет меняется на желтый цвет).

11. Анализ: взять пустую скважину как нулевую, прочитать абсорбанцию при 450 нм после добавления стоп раствора и в течение 15 мин

Вычислить:

Возьмите стандартную плотность как горизонтальную, значение OD для вертикальной, нарисуйте стандартную кривую на графической бумаге,Найти соответствующую плотность в соответствии с выборкой значение OD по кривой выборки, умноженное на кратное разбавления, или вычислить уравнение регрессии по прямой линии стандартной кривой со стандартной плотностью и значением OD, с выборочным значением OD в уравнении,рассчитать плотность пробы, умноженное на коэффициент разведения, получается фактическая плотность образца.