Человеческое Thioredoxin, набор Trx ELISA

Человеческое Thioredoxin, набор Trx ELISA

Материалы обеспеченные с набором

Процедура

Разбавление стандартов

колодцы 1.Ten установили для стандартов в stripplate Microelisa. В хорошо 1 и хорошо 2, стандартное решение 100μl и стандартный буфер разбавления 50μl добавлены и смешаны хорошо. В хорошо 3 и хорошо 4, решение 100μl от хорошо 1 и хорошо 2 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. решение 50μl сброшено от колодца 3 и хорошо 4. В хорошо 5 и хорошо 6, решение 50μl от хорошо 3 и хорошо 4 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. В хорошо 7 и хорошо 8, решение 50μl от хорошо 5 и хорошо 6 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. В хорошо 9 и хорошо 10, решение 50μl от хорошо 7 и хорошо 8 добавлено соответственно. После этого стандартный буфер разбавления 50μl добавлен и смешан хорошо. решение 50μl сброшено от колодца 9 и хорошо 10. После разбавления, полный том во всех колодцах 50μl и концентрация 3600 pg/ml, 2400pg/ml, 1200 pg/ml, 600pg/ml и 300 pg/ml, соответственно.

2. В stripplate Microelisa, выйдите колодец пустой как пустой контроль. В колодцах образца, добавлен буфер разбавления образца 40μl и образца 10μl (множитель дилюции 5). Образцы должны быть нагружены на дно без касаться хорошей стене. Смешайте хорошо с нежный трясти.

3. Инкубация: инкубируйте минуту 30 на 37℃ после загерметизированный с мембраной плиты закрытия.

4. Разбавление: разбавьте сконцентрированный моя буфер с дистиллированной водой (30 раз для 96T и 20 раз для 48T).

5. Стирка: осторожно слезьте мембрану плиты закрытия, аспирируйте и refill с моющим раствором. Сбросьте моющий раствор после отдыхать на 30 секунд. Повторите моя процедуру для 5 раз.

6. Добавьте реагент HRP-конъюгата 50 μl к каждому колодцу за исключением пустого контроля хорошо.

7. Инкубация как описано в разделе 3.

8. Стирка как описано в разделе 5.

9. Расцветка: Добавьте решение a хромогена 50 μl и решение b к каждому колодцу, смешивание хромогена 50 μl с нежно трясти и инкубируйте на 37℃ на 15 минут. Пожалуйста избегите света во время расцветки.

10. Прекращение: добавьте 50 μl останавливает решение к каждому колодцу для того чтобы прекратить реакцию. Цвет в колодце должен изменить от сини для того чтобы пожелтеть.

11. Прочитанный absorbance O.D. на 450nm используя читателя плиты Microtiter. Значение OD пустого контроля хорошо установленное как нул. Assay должен быть унесен не позднее 15 минут после добавления останавливает решение.