Каталог набора EBV-VCA IgA Ab ELISA нет: BE501A
Immunoassay энзима для обнаружения антитела IgA к вирусному антигену capsid (VCA) вируса Epstein-Barr (EBV).
 
1. ПРИНЦИП ASSAY
Набор EBV-VCA IgA Ab ELISA использует систему обнаружения где колодцы microplate покрыты с рекомбинатным антигеном соответствие к сильно антигенному этапу EBV-VCA. Образцы сыворотки или плазмы, контроли добавлены к колодцам. Во время инкубации, антитела IgA специфические для настоящего момента EBV-VCA в образце свяжут к рекомбинатному антигену зафиксированному на колодцы microplate. Колодцы помыты для того чтобы извлечь unbound материалы, и анти--человеческий конъюгат пероксидазы IgA свяжет к комплексу антиген-антитела и сверхнормальные unbound конъюгаты энзима снова извлекаются путем мыть. Субстрат энзима, tetramethylbenzidine (TMB), добавлен на инкубации субстрат будет hydrolyzed связанным энзимом и голубой или зеленоголубой цвет превращается в колодцах содержа антитела EBV-VCA IgA. Реакция энзима остановлена добавлением серной кислоты. Начатая интенсивность цвета прочитана спектрофотометрически на 450nm (450 nm/630 nm) и пропорциональна к количеству антител присутствующих в образце.
РЕАГЕНТЫ
 
2. Материалы обеспеченные с наборами:

 
3. ПРОЦЕДУРА ПО ASSAY

1. Принесите набор ELISA (все реагенты), и образцы к комнатной температуре перед использованием (приблизительно 30 минут).
2. Dilute сконцентрировал 1:19 буфера мытья с ddH2O. Например, 5 ml концентрата буфера мытья должны быть разбавлены к полному тому 100 mL с деионизированный или дистиллированная вода.
3. Для каждого теста, установите один пробел хорошо как управление предпосылки, 2 положительных и 3 отрицательных контроля. Распределите надежное управление 100ml и отрицательный дубликат контроля в индивидуальные колодцы. Ни образцы ни HRP-конъюгат должны быть добавлены в пробел хорошо.
4. Распределите 100ml разбавления образца в колодцы индивидуального теста за исключением контролей.
5. Добавьте 10ml каждого образца теста в колодцы теста; вортекс, который нужно смешать.
6. Инкубируйте на 30 минут на 37°C
7. Помойте каждое хорошо 5 раз путем заполнять каждый колодец с разбавленным буфером мытья, тогда переворачивать плиту энергично для того чтобы получить всю воду вне и преграждать оправу колодцев на бумаге вещество-поглотителя в течение нескольких секунд.
8. Добавьте 100ml конъюгата энзима к каждому колодцу. Смешайте его нежно путем завихряться плита microtiter на плоском стенде на минуты 1. Не добавьте конъюгат энзима к пробелу хорошо.
9. Инкубируйте на 20 минут на 37°C
10. Помойте плиту 5 раз как раздел 7.
11. Добавьте одно падение (50ml) решения a субстрата (HRP-субстрата) к каждому колодцу, тогда добавьте одно падение (50ml) решения b субстрата (TMB) к каждому колодцу. Смешайте нежно и инкубируйте на 37°C на 30 минут.
12. Добавьте одно падение (50ml) решения стопа к каждому колодцу для того чтобы остановить реакцию цвета. Прочитайте значение OD на 450 nm/630 nm с двойным читателем фильтровальной пластинки. Вариант для чтения значения OD на 450 nm с одиночным читателем фильтровальной пластинки. (используя значение OD пустого колодца для того чтобы исправить полностью чтение OD от всех колодцев)