Процедура операции

1) Экстракция нуклеиновой кислоты Экстракция ДНК из образцов с использованием надлежащего комплекта экстракции.Рекомендуется элюировать нуклеиновую кислоту примерно с помощью 100 мкл элуирующего буфера (TE или H2O без нуклеазы) на последнем этапе экстракции.Очищенную нуклеиновую кислоту следует использовать немедленно или хранить при температуре -20°С.

2) Приготовление положительного контроля До 12 месяцев положительный контроль может храниться при температуре окружающей среды перед регидратацией.Перед использованием его следует регидрировать, добавив 250 μl буфера TE или H2O без нуклеазы.Использовать немедленно или хранить при температуре -20°С.

3) Подготовка смеси RT-PCR в режиме реального времени

A) Откройте вакуумную упаковку и выведите 8-трубные полоски, содержащие реагент.Если поставленные трубы не совместимы с вашим прибором, переносите реагентную гранулу в оптическую трубку, совместимую с вашим прибором.

B) Откройте трубки и отбросьте крышки (не подходят для ПЦР в режиме реального времени) и приготовьте реакционную смесь на льду, как показано ниже.

* В качестве отрицательного контроля может использоваться вода без нуклеазы.

C) Запечатайте трубки оптическими крышками или 96-скважиной пленкой с оптической пленкой (не поставляется).

D) Вращаем трубки на низкой скорости в течение 10 ~ 15 секунд, и центрифугируем при 3000 оборотах в минуту в течение 20 секунд и помещаем их в инструмент ПЦР в реальном времени.

3) Настройка RT-PCR: Установите объем реакции на 25μl и процедуру усиления PCR, как показано ниже.Флуоресценция ROX (для Orf1ab) и CY5 (для гена RNase P) при 60 °C, и выберите NONE как пассивную ссылку.
4) Анализ и интерпретация результатов Установите пороговую линию согласно инструкциям прибора.

A) Контроль качества:

B) Интерпретация результатов выборки

Технические параметры: